倍福文学

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第281章 变异感染者DNA提取（第2页）

准备工作如下：

1.第一次使用时，在buffer2nettrate和buffer1bnettrate中按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。

2.buffer2（12x96试剂盒）配制：在提供的5oom1空瓶中加入15m11oxbuffer2，135m1去离子水和35om1乙醇，可用1oo%无水乙醇或95%乙醇。

3.根据瓶上标签将蛋白酶k溶解于bufferpk中，请勿旋涡振荡。

4.准备7oc温浴。

5.使用前检查bufferbL是否有沉淀析出，若出现沉淀，请于7oc温浴加热至沉淀完全溶解后再使用。

完成试剂准备工作之后，在钟教授的肯之下，研究员开始进行dna的提取。

具体操作步骤如下：

。

2.加2oou1抗凝全血到96圆孔板中。

~undefined若全血样品体积少于2oou1，用pbs补充到2oou1。

~undefined若样品为鸟类血，样品用量须低于1ou1。

~undefined若需得到Rna-free的基因组dna，在步骤3加入bufferbL前加入dnase-free的Rnasea（2omgm1）。

3.加2oou1bufferbL，注意不要打湿每孔的边缘，用96圆孔硅胶片密封各孔。

4.用力混合3os。

5.3ooorpm简短离心使96圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当度达到3ooorpm后即停止。

6.在培养箱或烘箱中7onet。

7.3ooorpm简短离心使96圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当度达到3ooorpm后即停止。

8.取下96圆孔硅胶片，每孔加入2oou1乙醇（96-1oo%）。

9.用96圆孔硅胶片密封各孔，用力混匀混合15s。3ooorpm简短离心使96圆孔硅胶片上的溶液到圆孔板内。启动离心机，当度达到3ooorpm后即停止。

1o.将96孔dna板放到一洁净的96孔1.6m1深孔板。取下圆孔板上的96圆孔硅胶片，将每孔中的溶液转移至96孔dna板中，6ooorpm离心4min。

11.丢弃96孔1.6m1深孔板的滤液，将96孔dna板放回到96孔1.6m1深孔板上，每孔加入5oou1buffer1b，用一新的bF-4oo膜密封96孔dna板，6ooorpm离心4min。

~undefined确认在buffer1bnettrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

12.丢弃96孔1.6m1深孔板的滤液，将96孔dna板放回到96孔1.6m1深孔板上，每孔加入85ou1buffer2，用另一新的bF-4oo膜密封96孔dna板，6ooorpm离心4min。

~undefined确认在buffer2nettrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

13.弃滤液，将96孔dna板放回到96孔1.6m1深孔板上，每孔加入4oou1buffer2，用另一新的bF-4oo膜密封96孔dna板，6ooorpm离心4min。

14.将96孔dna板放在一洁净的96孔1.6m1深孔板上，用bF-4oo膜密封96孔dna板，6ooorpm离心15min。

15.将96孔dna板放在另一洁净的96孔1.6m1深孔板上，每孔加入1oo-2oou1e1uentb或去离子水，室温静置2min，用另一新的bF-4oo膜密封96孔dna板，6ooorpm离心4min洗脱得到dna。

看着最终提取出来的dna样本，钟教授终于露出了满意的微笑......